Дипломная работа на тему: Аналитический обзор. Мутации и их роль. Классификация. Причины возникновения

Введение

В настоящее время лабораторная диагностика занимает важное место в пропедевтике заболеваний. Большинство анализов биохимических показателей крови и других биологических жидкостей, несомненно, очень популярны сегодня и не без основания: они могут характеризовать как состояние всего организма, так и отдельных органов. Но, к сожалению, они не дают быстрого, точного и достаточно информативного ответа в ряде случаев.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени - это метод диагностики, который позволяет проверить генетический материал, экстрагированный из исследуемого клинического образца, на наличие в его составе участка чужеродной или измененной генетической информации. Кроме того, этот метод используется для получения копий непротяженных участков ДНК, специфичных для каждого генетически обусловленного признака. Исследование образцов ткани, содержащих опухоль, проводят при помощи метод PCR в реальном времени. Порог чувствительности данного метода, при использовании нами набора Therascreen всего пять процентов мутантных клеток.

Ученые-практики все чаще отмечают возрастающее количество онкологических заболеваний. В ряде опухолей обнаруживаются аномальные рецепторы эпидермального фактора роста, что обусловлено наличием активирующих мутаций в соответствующем гене.

Во всех странах мира отмечается резкое повышение частоты заболевания раком легкого. Из редкого заболевания, которым считался в прошлом столетии, рак легких превратился в одну из наиболее частых причин смерти онкологически больных людей. Ежегодно в Российской Федерации заболевают раком более 63000 человек, в том числе свыше 53000 мужчин. Более 20000, или 34,2%, выявляются в IV стадии заболевания. Несмотря на то, что уровень смертности от рака легкого в ряде стран снизился в последнее десятилетие, общее количество умерших от этого заболевания может сравниться с совокупным числом погибших от рака толстой кишки, поджелудочной и предстательной железы [Мерабишвили, Дятченко, 2000].

Уже в середине 90-х годов прошлого века стало очевидно, что химиотерапия на основе препаратов платины достигла "плато" своей эффективности. Одним из путей улучшения результатов терапии злокачественных новообразований является индивидуализация тактики лечения этих больных: с помощью определения генов-мишеней в опухолевой ткани. Наиболее изученной группой таких мишеней является семейство ростовых факторов рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) [Имянитов, 2010].

Индивидуализация тактики лечения больных заключается в применении таргетных препаратов, подавляющих активность фермента эпидермального фактора роста. Эти препараты являются низкомолекулярными ингибиторами тирозинкиназ, которые блокируют АТФ-связывающий внутриклеточный домен EGFR и тем самым сигналы поступающие от этого рецептора не принимаются.

Цель исследования: оценка возможностей использования генетических маркеров опухолевой ткани при раке легких.

В связи с целью были поставлены следующие задачи:

. Определить частоту возникновения мутаций в гене EGFR.

. Определить наиболее распространенный гистологический тип рака легкого при выявлении мутаций в гене EGFR.

. Проследить влияние вдыхаемого табачного дыма на возникновения мутаций.

. Выявить зависимость возникновения мутаций в соответствии с половой принадлежностью.

Оглавление

- Введение

- Аналитический обзор

- Мутации и их роль. Классификация. Причины возникновения

- Активирующие мутации в гене EGFR

- Проблемы диагностики рака легких

- Метод PCR Real Time

- Зависимость выбора тактики лечения от мутаций

- Материал и методы

- Материал исследования

- Методы исследования

- Выделение и оценка количества ДНК

- Количественная PCR в реальном времени с использованием технологии ARMS и Scorpions

- Методы статистической обработки данных

- Метод PCR Real Time в диагностике мутаций EGFR Заключение

- Библиографический список

- Приложение

Заключение

Рак легкого отличается высокой частотой рецидивов и генерализации процесса, даже в случае если лечение начато достаточно рано. Однако существует проблема ранней диагностики рака легкого: зачастую больные попадают к врачу с запущенным распространенным раком, часто с метастазами. Все это обусловливает необходимость прогнозирования течения заболевания и разработки стратегии лечения рака легкого на основе более глубокого изучения процессов канцерогенеза и молекулярно-генетических особенностей конкретных опухолей.

Подходы к лечению опухоли легкого и его результативность в значительной степени зависят от морфологических и генотипических особенностей рака. То есть лечение должно быть адресное, и зависит оно от причин возникновения рака легких.

Проведенное нами исследование позволило оценить возможность использования мутации в гене ЕGFR как генетический маркер и сделать несколько выводов:

Список литературы

1. Актуальные вопросы комбинированного лечения рака легкого / Барчук А. С. [и др.] // Вопросы онкологии. 2012. №2. С. 253-259.

2. Баранов В.С. Молекулярная медицина: молекулярная диагностика, превентивная медицина и генная терапия // Молекулярная биология. 2000. Т. 34, №4. С.19-22.

. Батурина О.А., Бреннер Е.В., Суслякова О.А. Определение нуклеотидных последовательностей - перспективный метод диагностики наследственных заболеваний // Сборник трудов конференции "Фундаментальные науки - медицине", Новосибирск. - 2-5 сентября 2008. - С. 76-80.

. Власов П.В., Барышников А.С., Ионова В. Г. Клинико-рентгенологическая диагностика рака легкого // Медицинская газета. 2005. №17. С.15-18.

. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. М., 2002. 589 с.

. Гуторов С.Л., Борисова Е.И. Поддерживающая терапия немелкоклеточного рака легкого // Современная онкология. 2012. №3. С.14-19.

. Давыдов М. И., Полоцкий Б. Е. Детекция молекулярных нарушений, характерных для рака легкого. Возможности использования в клинической практике // Онкология. 2003. №5. С. 44-47.

. Демин А.С. Мутации человека. // Наука. 2009. №9. С. 35-37.

. Жучеко А.А. Генетика. М., 2004. 240 с.

. Иванцов А.О. Морфологические и иммуногистохимические особенности опухолей человека с мутацией рецептора эпидермального фактора роста: автореф. дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук. Спб, 2011. 32 с.

. Имянитов В.Н. Общие представления о таргетной терапии // Онкология. 2010. №3. С. 123-130.

. Левченко Е.В., Моисеенко В.М., Мацко Д.Е. Конверсия неоперабельной стадии рака легкого в операбельную у EGFR-позитивных пациентов на фоне лечения гефитинибом: два клинических случая // Современная онкология. 2010. №2. С.88-92.

. Мерабишвили В.М., Дятченко О.Т. Статистика рака легкого (заболеваемость, смертность, выживаемость)// Онкология. 2000. №3. С. 3-5.

. Моисеенко В. М., Проценко С.А. Эффективность гефинитиба (Ирессы) в первой линии терапии // Вопросы онкологии. 2010. №1. С. 20-23.

. Новейшие технологии в генодиагностике: полимеразная цепная реакция в реальном времени (Real-Time PCR) / А.Н. Екимов [и др.] // Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Министерства Здравоохранения Российской Федерации. 2008.

. Подольская С.В. Методы молекулярной генетики в современной медицине //Журнал практического врача. 2002. №5. С. 48-50.

. Применение Ирессы (гефитиниба) в качестве терапии первой линии для лечения неоперабельных аденокарцином легкого, содержащих мутацию в гене EGFR / В.М. Моисеенко [и др.] // Современная онкология. 2010. №1. С.33-37.

. Рагулин Ю.А. Таргетные препараты и лучевая терапия в лечении местнораспространенного рака легкого // Современная онкология. 2012. №2. С. 156-160.

. Тюляндин С. А. Перспективные подходы лекарственной терапии немелкоклеточного рака легкого // Онкология. 2003. №5. С. 27-31.

. Чудов С.В. Устойчивость видов и популяционная генетика хромосомного видообразования: Монография. М., 2002. 97с.

. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека: в 3-х т. Т. 2: Генетика человека. Пер с англ. М., 1990. 378 с.

23. Потанин А.В., Потанин В.П. Ранняя диагностика рака легкого (обзор по материалам электронных средств массовой информации) <http://pmarchive.ru/rannyaya-diagnostika-raka-legkogo-obzor-ро-materialam-elektronnyx-sredstv-massovoj-informacii/> // PMARCHIVE.RU <http://pmarchive.ru/>. Режим доступа: <http://pmarchive.ru/rannyaya-diagnostika-raka-legkogo-obzor-ро-materialam-elektronnyx-sredstv-massovoj-informacii/> (дата обращения 18.05.2013)

. Роль рецептора EGFR и мутаций гена EGFR в патогенезе рака легкого // CANCERGENOME.RU. Режим доступа: http: //www.cancergenome.ru/page39 <http://www.cancergenome.ru/page39> (дата обращения 20.11.2012)

. Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) // HUMBIO.RU. Режим доступа: <http://humbio.ru/humbio/cytology/002fde31.htm> (дата обращения 20.11.2012)

26. Набор Real-Time-EGFR-L858R. Набор реагентов для выявления мутации L858R в гене EGFR методом ПЦР в режиме реального времени // BIOLINKLAB.RU. Режим доступа: http: //www.biolinklab.ru/system/files/manuals/real-timepcregfrl858r.pdf?download=1 <http://www.biolinklab.ru/system/files/manuals/real-timepcregfrl858r.pdf?download=1> (дата обращения 28.11.2012)

. Тарантул В. З. Геном человека: Энциклопедия, написанная четырьмя буквами // MYGENOME.RU. Режим доступа: http: //mygenome.ru/articles/89/ <http://mygenome.ru/articles/89/> (дата обращения 28.11.2012)

. Человек продолжает прогрессивно мутировать // PRIMEINFO.NET.RU. Режим доступа: http:// primeinfo.net.ru/ news1908.html?submit <http://primeinfo.net.ru/news1908.html?submit> (дата обращения 5.12.2012)