Докторская диссертация на тему: Сущность метода иммунохроматографического анализа и его аппаратурное оформление

Введение

В современной медицинской практике с каждым годом возрастает роль лабораторной диагностики, выступающей в качестве основного инструмента постановки диагноза и мониторинга терапии. Одним из бурно развивающихся и востребованных методов лабораторной диагностики является иммунохроматографический анализ.

Иммунохроматографическим анализом называется иммунохимический метод анализа, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включает в себя определение наличия определенных концентраций веществ в биологических материалах (моча, цельная кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, кал и т. д.) Этот вид анализа осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-кассет, которые обеспечивают оперативность проведения тестирования.

Таким образом, иммунохроматографический метод анализа относится к серологическим методам диагностики заболеваний человека и животных, то есть, к направлению лабораторных исследований обнаружения специфических антител в основном в сыворотке крови.

ИХА считается относительно молодым методом анализа, он часто обозначается в литературе также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, экспресс-тест или экспресс-анализ, Quikstrip cassette (тест-кассета) Quikstrip dipsti ск (тест-полоска).

Принцип использования иммунохроматографического анализа состоит в том, что при погружении теста в физиологическую жидкость она начинает продвигаться вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии.

Тонкослойная хроматография как метод анализа впервые была введена в 1951 году Кирхенером, который в рамках этого метода применил связывание свойства крахмала и гипса и увеличил размер стеклянного носителя (одного из разновидностей двуокиси кремния).

Подвижной фазой в данном случае является физиологическая жидкость, вместе с током, по которой двигаются и антитела с красителем.

Приведем конкретный пример, иллюстрирующий принцип этого вида анализа. Кровь в объеме 100 микролитров через специальное приемное окно наносится на подложку для образца.

Форменные элементы задерживаются на фильтре, а хроматографической полосы достигает только плазма. Далее белки-маркеры достигают плазмы крови вступают в реакцию с моноклональными антителами, меченными коллоидным золотом с образованием комплексов антиген-антитело (коллоидное золото - специальный краситель, различимый даже в сверхнизких концентрациях).

Затем под влиянием капиллярных сил эти комплексы двигаться по хроматографической мембране и вступают в реакцию с иммобилизованными антителами в соответствующих зонах к тем самым белкам. Если определяемый белок - маркер присутствует в минимальном достаточном количестве, то окрашенный конъюгат, связанный с белком, накапливается в зоне иммобилизованных антител напротив данного белка. В результате этого образуется структура, похожая на бутерброд. Свободный конъюгат продвигается по хроматографической мембране и захватывается в контрольной полосе иммобилизованными вторичными антителами.

В том случае, если в зонах захвата накопится достаточное количество иммунных комплексов, то полосы по причине содержания частиц коллоидного золота, приобретают бордовый оттенок. При этом контрольная зона окрашивается в любом случае, отсутствие четкого окрашивания (цветной полосы) говорит об ошибке определения и о том, что исследование необходимо повторить.

В том случае, если в зонах захвата не содержится ни одной яркой цветной полосы, в то время как в контрольной зоне имеется цветная полоса, то результат тестирования считается отрицательным. Если же в зонах захвата иммунных комплексов в течение 15 минут появились цветные полосы, тест является положительным.

Таким образом, можно сказать, что метод ИХА использует для перемещения антигенов и антител полярные силы.

Приборы для осуществления иммунохроматографического анализа сконструированы таким образом, что едва видимое присутствие окрашенной полосы может говорить о повышении концентрации белка-маркера выше порогового уровня, которое соответствует показателям: 5 нг/мл для МВ-креатинкиназы и 50 нг/мл для белка мышц - миоглобина и 0,51 нг/мл для тропонина.

Кроме качественной ИХА-диагностики разработаны были разработаны методы количественного иммунохроматографического анализа. Принцип таких приоров состоит в следующем. Вместо визуальных красителей в тестовых системах используется флуоресцентная метка, что увеличивает чувствительность теста, но при этом подразумевает использование специального прибора, обеспечивающего возможность количественного анализа. Продолжительность анализа, как правило, составляет 15-20 минут. Многие специалисты в области кардиологии считают, что применение методов экспресс-диагностики кардиомаркеров позволяет повысить скорость постановки диагноза острого инфаркта миокарда.

Оглавление

- Введение

- Сущность метода иммунохроматографического анализа и его аппаратурное оформление

- Особенности метрологического обеспечения иммунохроматографического анализа

- Наиболее часто встречающиеся проблемы при статистической обработке результатов иммунохроматографического анализа

- Заключение

- Список литературы