Создать конструкцию для получения интерлейкина-1 бета (ИЛ-1?) человека путем экспрессии в E.coli.
Исходные данные:
Ген ИЛ-1? - https :// www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/M15330.1
В качестве дополнительной последовательности, облегчающей очистку, использовать пептид WSHPQFEK (Strep-tag).
В качестве линкера использовать сайт для расщепления фактором свертывания крови Xа.
Вектор pET-9d (найти на сайте https://www.snapgene.com/)
1 .Изучить карту вектора, определить основные структурные элементы, необходимые для экспрессии целевого белка.
2. Выбрать сайты рестрикции для вставки гена.
3. Сконструировать (запланировать) химерную последовательность (см. исходные данные) для вставки в вектор по выбранным сайтам, провести ее проверку и оптимизацию.
4. Предложить способ получения гена и праймеры для введения дополнительных последовательностей и сайтов рестрикции.
5. Предложить способ отбора клонов E.coli, трансфецированных конструкцией с целевым геном, а также способ проверки корректности вставки.
6. Указать метод, с помощью которого будет проводиться выделение химерного белка.
7. Указать, как будет выделен ИЛ-1? из состава химерной последовательности.
Выполнить как продолжение презентации во вложении
